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售后问题与反馈


·收到细胞前应该做哪些准备?

客户应具有一定细胞培养知识与经验,并具备基本实验设备,如细胞培养实验室、无菌操作台、CO2培养箱,倒置显微镜等;还应准备好相应的无菌培养基、血清、双抗、细胞培养瓶、培养板等。


·细胞以什么形式运输?

Shinecell®细胞发货时,保证细胞处于生长对数期;贴壁细胞达到75%以上汇合度,约5×10^5cells/T25细胞培养瓶;传代次数5代以内;冻存细胞发2个冻存管;无微生物污染。


·细胞发货标准是什么?规格、数量是多少?

Shinecell®细胞通常用T25细胞培养瓶培养,发货时用相应的完全培养基灌满细胞瓶,密封瓶口后放在包装盒内,以快递的方式发送给客户。天气温度于4℃或距离较远有特殊需求,以冻存细胞,干冰运输的方式发货。


·收到细胞后如何操作?

1、首先,观察细胞瓶是否完好,培养液是否有漏液、浑浊等现象。若有,请及时与我们技术支持联系。

2、用75%酒精擦拭细胞瓶表面,显微镜下观察细胞状态。因运输问题,部分贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落,将细胞置于细胞培养箱内静置培养,隔天再取出进行观察。

3、仔细阅读细胞说明书,了解细胞相关信息,如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等。

4、可将培养瓶内多余的培养基转移至50ml无菌离心管中,备用;细胞传代时,可以将该培养基按照一定比例和客户自备的培养基混合使用,让细胞逐渐适应培养条件。

5、确认细胞状态良好后,应及时将细胞冻存,再进行后续的实验,避免后期实验失误可能发生细胞污染或死亡而导致的细胞丢失。

6、建议客户收到细胞后前3天,100X、200X、400X各拍3-5张细胞照片,记录细胞状态,便于沟通交流。


·是否可以更换细胞培养基?

不建议替换。每株细胞均有其特定使用且已适应的培养基,而且经过一定时间驯化后,若骤然改变培养条件,细胞有可能出现不适应,表现出生长缓慢、颗粒增多、死细胞出现,造成细胞无法存活;也有些细胞在更换培养基后也能正常的生长,细胞状态也能维持,但问题会出现在冻存后期的复苏过程,有可能细胞没法复苏,所以不建议随便更换培养基。


·冻存管应如何解冻?

取出冷冻管后,须立即放入37 °C水槽中快速解冻,轻摇冷冻管使其在1分钟内全部融化,并注意水面不可超过冷冻管盖沿,否则易发生污染情形。另冷冻管由液氮桶中取出解冻时,必须注意安全,预防冷冻管之爆裂。


·细胞冷冻管解冻培养时,是否应马上去除DMSO?

除少数特别注明对DMSO敏感之细胞外,绝大部分细胞株(包括悬浮性细胞),在解冻之后,可直接放入10-15ml新鲜培养基,待隔天再置换新鲜培养基以去除DMSO即可,如此可避免大部分解冻后细胞无法生长或贴附之问题。


·培养基中是否须添加抗生素?

除于特殊筛选系统中外,一般正常培养状态下,培养基中不应添加任何抗生素,但实际操作中有时会加入1%的青链霉素来避免细菌污染。


·悬浮细胞应如何传代处理?

一般仅需持续加入新鲜培养基于原培养角瓶中,稀释细胞浓度即可,若培养液太多时,将细胞悬液移入离心管中,1000 rpm/min 室温离心5 min。弃上清,细胞沉淀用完全培养液重悬,按要求分瓶(视细胞密度而定1:4-1:8),每T25瓶加完全培养液至4-5 ml,37℃、5%CO₂孵箱培养。有些悬浮细胞趋于成团生长,此时细胞生长状态良好,当补液时,需避免反复吹打。


·细胞冻存的步骤是什么?

冻存方法一:冷冻管置于4 °C 30~60 分钟→ (-20 °C30 分钟*) → -80 °C 16~18 小时(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 长期储存。

冻存方法二:冷冻管置于已设定程序的可程序降温机中每分钟降1-3 °C至–80 °C以下,再放入液氮槽vapor phase长期储存。-20 °C 不可超过1小时,以防止冰晶过大,造成细胞大量死亡,亦可跳过此步骤直接放入-80 °C 冰箱中,但存活率会降低。


·应如何避免细胞污染?

细胞污染的种类可分成细菌、酵母菌、霉菌、病毒和霉浆菌。造成细胞污染的主要原因有无菌操作技术不当、操作室环境不佳、实验耗材污染、血清污染和细胞来源污染等。严格的无菌操作技术、清洁的环境和品质良好的细胞来源是避免污染的最好方法。


·悬浮细胞应如何传代处理?

一般仅需持续加入新鲜培养基于原培养角瓶中,稀释细胞浓度即可,若培养液太多时,将细胞悬液移入离心管中,1000 rpm/min 室温离心5 min。弃上清,细胞沉淀用完全培养液重悬,按要求分瓶(视细胞密度而定1:4-1:8),每T25瓶加完全培养液至4-5 ml,37℃、5%CO₂孵箱培养。有些悬浮细胞趋于成团生长,此时细胞生长状态良好,当补液时,需避免反复吹打。


·购买的细胞冷冻管经解冻后,为何会发生细胞数目太少的情形?

研究人员在解冻细胞后出现细胞数目太少,大都是因为离心过程操作上的失误,造成细胞的物理性损伤,以及细胞流失。建议细胞解冻后不要立刻离心,待细胞生长隔夜后再更换培养基即可。


·购买的细胞出现死亡率高或状态不佳的可能原因?

研究人员在细胞培养时出现存活率不佳,常见原因可归纳为:培养基使用错误或培养基品质不佳。血清使用错误或血清的品质不佳。解冻过程错误。冷冻细胞解冻后,加以洗涤细胞和离心。悬浮细胞误认为死细胞。培养温度使用错误。细胞置于–80 °C太久。


·收到细胞前应该做哪些准备?

客户应具有一定细胞培养知识与经验,并具备基本实验设备,如细胞培养实验室、无菌操作台、CO2培养箱,倒置显微镜等;还应准备好相应的无菌培养基、血清、双抗、细胞培养瓶、培养板等。